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淺談qPCR檢測中「內參」的意義

更新時間:2022-12-14  |  點擊率:3119

實時熒光定量

核酸擴增檢測系統(tǒng)

qPCR主要是利用插入性染料或熒光探針,人們可以通過監(jiān)控PCR過程中的熒光強度比較多個樣品的DNA水平。

qPCR本質就是測定樣品中某個模板的起始量ct值。但在實際操作過程中,由于之前DNA提等步驟,各個步驟存在不同的效率,在實驗過程中也存在加樣誤差、各孔溫度差等影響,每個樣本的Ct值并無法真實反映每個樣品中初始模版的絕對量,這就使得我們無法對不同處理的樣本進行分析評價。因此,我們需要一個參考標準對每一個樣本進行校正,排除其他無關因素帶來的的影響。

內控(內參,Internal Control),也就是內部參照測量,也叫內部控制。使用內參的目的是便于在分析過程中,將不同樣品的起始量做均一化處理。內參通常選擇在不同組織中有穩(wěn)定表達量或不受實驗處理影響的基因,在每個樣品中的表達量不發(fā)生變化,比如管家基因(house-keeping gene)。以小鼠為例,常用的內參有β-actin、18S rRNA、α-tublin和GAPDH等,有時也可以用基因組DNA做內參。

但需要注意的是,現在也有觀點認為,這些基因在不同組織中豐度也不同,例如GAPDH,在線粒體含量高的組織中豐度高。有時候,不同的研究實驗需要選擇不同的內參。一些文章在發(fā)表時,審稿人也會要求使用兩個內參加以證實。

MB Venor®Gem qEP,用經典的qPCR方法檢測樣品中是否含有支原體,其中也會用到內參(內控),可以在對支原體其作用也是對樣品做均一化處理,保證實驗結果的穩(wěn)定。

MB Venor®Gem qEP

產品特點:

1.內控對照為獨立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性,一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細胞的支原體物種(包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體)。與細菌和真核DNA無交叉反應。

3.高靈敏度,檢測限可達到≤10CFU/ml。

4.相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA,便于特異性驗證。

5.有相應配套的支原體定量標準品,便于最后定量檢測。


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