qPCR（定量聚合酶鏈反應(yīng)）方法在檢測(cè)細(xì)胞樣品中的支原體時(shí)具有多個(gè)優(yōu)勢(shì)：

高靈敏度和特異性： qPCR能夠檢測(cè)極低濃度的核酸，使其對(duì)支原體的早期檢測(cè)更為敏感。引物的設(shè)計(jì)可以確保對(duì)目標(biāo)支原體的高度特異性，減少誤報(bào)和假陽(yáng)性的可能性。

快速性： qPCR是一種高效的方法，通常在幾小時(shí)內(nèi)就能完成。這使得可以迅速獲取支原體存在的定量信息，為及時(shí)采取措施提供了可能。

定量能力： 與傳統(tǒng)PCR不同，qPCR可以提供關(guān)于支原體數(shù)量的定量信息，而不僅僅是檢測(cè)是否存在。這對(duì)于評(píng)估感染的程度和追蹤治療效果非常重要。

自動(dòng)化和高通量： qPCR可以輕松集成到自動(dòng)化平臺(tái)中，實(shí)現(xiàn)高通量的樣品處理。這使得可以同時(shí)處理大量樣品，提高檢測(cè)的效率。

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)： qPCR是實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)的技術(shù)，能夠在擴(kuò)增過(guò)程中實(shí)時(shí)測(cè)量核酸的累積量。這有助于確定PCR反應(yīng)何時(shí)進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)階段，提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。

低檢測(cè)限： qPCR的靈敏度使其能夠檢測(cè)非常低濃度的核酸，即使在樣品中支原體數(shù)量很少的情況下也能夠可靠地檢測(cè)到。

綜合來(lái)看，qPCR在檢測(cè)細(xì)胞樣品中的支原體方面具有高度敏感、定量準(zhǔn)確、快速高效等優(yōu)勢(shì)，使其成為支原體研究和臨床檢測(cè)中的重要工具。

在進(jìn)行qPCR檢測(cè)前，需要對(duì)樣品進(jìn)行處理。在處理過(guò)程中，以下幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)需要注意。

一般來(lái)說(shuō)，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品不應(yīng)長(zhǎng)時(shí)間放置。這可能會(huì)損害標(biāo)準(zhǔn)品的恢復(fù)。

使用的反應(yīng)容器也會(huì)對(duì)樣品DNA提取造成影響，如果沒有使用低結(jié)合核酸反應(yīng)管，DNA最終容易粘在表面。

在提取DNA之前，將200µl樣品基質(zhì)在70℃下失活10分鐘是很重要的。培養(yǎng)基及其所含的FBS對(duì)PCR有抑制作用，無(wú)法檢測(cè)到標(biāo)準(zhǔn)品。

對(duì)于10cfu標(biāo)準(zhǔn)品，通過(guò)DNA提取對(duì)樣品進(jìn)行純化，對(duì)于NAT(核酸擴(kuò)增技術(shù))即傳統(tǒng)PCR或qPCR的后續(xù)擴(kuò)增具有重要意義。

體積不能偏離標(biāo)準(zhǔn)推薦量。如果改變了濃度因子，則有可能樣品基質(zhì)中不包含任何標(biāo)準(zhǔn)品。

如果出現(xiàn)以上幾種可能性，則標(biāo)準(zhǔn)品或樣品沒有被檢測(cè)的效果就會(huì)被放大。